Competenze
Allestimento e Mantenimento di Colture Cellulari:
- Isolamento e preparazione di cellule primarie: Estrazione di cellule direttamente da tessuti animali o vegetali e loro preparazione per la coltura in vitro.
- Gestione di linee cellulari stabilizzate: Scongelamento, subcoltura (passaggio), crioconservazione e mantenimento di linee cellulari continue.
- Ottimizzazione delle condizioni di coltura: Selezione e preparazione di terreni di coltura appropriati, supplementi, fattori di crescita e matrici extracellulari per diverse tipologie cellulari.
- Controllo dei parametri ambientali: Gestione di incubatori per il mantenimento di temperatura, umidità e concentrazione di CO2 ottimali per la crescita cellulare.
- Prevenzione e gestione delle contaminazioni: Adozione di rigorose tecniche di asepsi per prevenire contaminazioni batteriche, fungine e da micoplasma. Rilevamento e gestione delle contaminazioni.
Manipolazione e Modificazione Cellulare:
- Trasfezione e transduzione: Introduzione di materiale genetico (DNA, RNA) o virus nelle cellule per studiare la funzione genica o produrre proteine ricombinanti.
- Infezione virale: Utilizzo di virus per infettare cellule in coltura a scopo di ricerca o per la produzione di vettori virali.
- Selezione clonale: Isolamento e crescita di singole cellule per ottenere popolazioni cellulari geneticamente omogenee.
- Differenziamento cellulare: Induzione della differenziazione di cellule staminali o progenitrici verso specifici tipi cellulari.
- Modificazione genetica (in contesti di ricerca): Utilizzo di tecniche di editing genomico come CRISPR-Cas9 per modificare il genoma delle cellule in coltura (esclusivamente a scopo di ricerca e sviluppo).
Analisi e Caratterizzazione Cellulare:
- Conteggio cellulare e valutazione della vitalità : Determinazione del numero di cellule e della percentuale di cellule vive utilizzando diverse metodologie.
- Analisi del ciclo cellulare: Studio della progressione delle cellule attraverso le diverse fasi del ciclo cellulare.
- Saggi di proliferazione e sopravvivenza cellulare: Misurazione del tasso di crescita e della risposta delle cellule a diversi stimoli o trattamenti.
- Citotossicità e saggio di citolisi: Valutazione degli effetti tossici di sostanze o trattamenti sulle cellule.
- Immunocitochimica e immunofluorescenza: Visualizzazione di proteine e altre molecole all'interno delle cellule utilizzando anticorpi marcati.
- Citofluorimetria: Analisi multiparametrica di singole cellule in sospensione per la quantificazione di proteine di superficie e intracellulari, l'analisi del ciclo cellulare, l'apoptosi e altre caratteristiche cellulari.
- Microscopia: Utilizzo di microscopi ottici, a fluorescenza e confocali per l'osservazione e l'analisi morfologica e funzionale delle cellule.
- Estrazione di proteine e acidi nucleici: Preparazione di lisati cellulari per l'isolamento di proteine, DNA e RNA per analisi successive.
Applicazioni delle Colture Cellulari:
- Modelli in vitro di malattie: Utilizzo di colture cellulari per studiare i meccanismi patogenetici delle malattie e testare potenziali terapie.
- Drug discovery e screening: Utilizzo di saggi cellulari ad alto rendimento per identificare nuovi farmaci e valutare la loro efficacia e tossicità .
- Tossicologia in vitro: Valutazione della tossicità di sostanze chimiche e ambientali utilizzando colture cellulari.
- Medicina rigenerativa e terapia cellulare: Coltura e manipolazione di cellule per applicazioni terapeutiche (es. trapianti di cellule staminali, ingegneria tissutale).
- Produzione di biomolecole: Utilizzo di colture cellulari per la produzione di proteine ricombinanti, anticorpi monoclonali e altri biomateriali.
- Ricerca di base: Studio dei processi biologici fondamentali a livello cellulare.
Aspetti Tecnici e di Qualità :
- Gestione della strumentazione di laboratorio: Utilizzo e manutenzione di incubatori, cappe a flusso laminare, microscopi, centrifughe, citofluorimetri e altre apparecchiature.
- Controllo di qualità : Implementazione e monitoraggio di procedure di controllo qualità per garantire la sterilità , la vitalità e la corretta identità delle colture cellulari.
- Gestione della documentazione: Compilazione e conservazione accurata di protocolli, procedure e registri relativi alle colture cellulari.
- Rispetto delle norme di biosicurezza: Adozione di rigorose misure di sicurezza per la manipolazione di cellule, terreni di coltura e reagenti potenzialmente pericolosi.
- Crioconservazione e gestione di biobanche cellulari: Congelamento e stoccaggio a lungo termine di colture cellulari vitali.